SweScript RT I First Strand cDNA Synthesis Kit

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貨號：

SJ21584

產(chǎn)品規(guī)格：

100 rxns

品牌：

萬物

購買數(shù)量：

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產(chǎn)品詳情操作說明注意事項

產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品利用改造后的突變體逆轉(zhuǎn)錄酶以總RNA或mRNA為模板，高效逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA，試劑盒中包含合成高質(zhì)量第一鏈cDNA所需的全部試劑，并提供兩種cDNA合成引物供選擇：Random Hexamer Primer和Oligo (dT)₁₈ Primer，合成的單鏈cDNA產(chǎn)物可直接用來進(jìn)行后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)。SweScript RT I (Reverse Transcriptase)是基于M-MLV Reverse Transcriptase并通過體外進(jìn)化篩選獲得的突變體逆轉(zhuǎn)錄酶，SweScript RT I無RNase H活性，避免了第一鏈cDNA合成反應(yīng)中DNA/RNA雜交體模板中RNA被降解，從而保證第一鏈cDNA合成量和長度；與野生型酶相比，SweScript RT I的熱穩(wěn)定性和合成效率大幅提高，可在42-55℃范圍內(nèi)高效合成cDNA，同時也可合成長達(dá)10 kb的cDNA。

儲存與運輸

冰袋（wet ice）運輸；

-20℃保存，12個月有效期。

組成

Component Number	Component	G3330-50	G3330-100
G3330-1	SweScript RT I Enzyme Mix^a	50 μL	100 μL
G3330-2	5×Reaction Buffer^b	200 μL	400 μL
G3330-3	Oligo (dT)₁₈ Primer (100 μM)	50 μL	100 μL
G3330-4	Random Hexamer Primer (100 μM)	50 μL	100 μL
G3330-5	Nuclease-Free Water	1 mL	1 mL
說明書		1份	1份

^a：含有RNase Inhibitor

^b：含有dNTP Mixture 和Mg²⁺

第一鏈cDNA合成步驟

1. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（推薦20 μL反應(yīng)體系）

Component	Volume
5×Reaction Buffer	4 μL
Oligo (dT)₁₈ Primer (100 μM)	1 μL
or Random Hexamer Primer (100 μM)	or 1 μL
or Gene Specific Primer (2 μM)	or 1 μL
SweScript RT I Enzyme Mix	1 μL
Total RNA/mRNA^*	0.1 ng-5 μg/10 pg-0.5 μg
Nuclease-Free Water	Add to 20 μL

注：針對高GC或復(fù)雜模板，可預(yù)先混合RNA模板、逆轉(zhuǎn)錄引物、無核酸酶水并在65℃保溫5 min后，迅速置冰上冷卻。然后再加入其他反應(yīng)組份。

2. 輕輕混勻并離心；

3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置：

Temperature	Time
25℃^a	5 min
50℃^b	15-30 min
85℃	5 s

a：如選擇使用Random Hexamer Primer，25℃孵育5 min后，再進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)；如選擇使用Oligo (dT)₁₈ Primer或Gene Specific Primer，可直接進(jìn)行50℃反應(yīng)；

b:對于高GC或復(fù)雜模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至55℃。

注意事項

1. 操作時請佩戴一次性手套，避免RNase污染。

2. 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

3. 如模板為真核生物來源，建議選擇Oligo (dT)₁₈ Primer，與真核生物mRNA的3' Poly A尾配對，可獲得最高產(chǎn)量的全長cDNA。

4. 原核生物RNA逆轉(zhuǎn)錄請選用Random Hexamer Primer或Gene Specific Primer。

5. Random Hexamer Primer適用性較廣，適用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。

6. 如逆轉(zhuǎn)錄后續(xù)為qPCR實驗，可將Oligo (dT)₁₈ Primer與Random Hexamer Primer混合使用，可使mRNA的各個區(qū)域cDNA合成效率相同，有助于提高定量結(jié)果的真實性和重復(fù)性。

本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！

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