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產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項
產(chǎn)品描述
本試劑盒提供了簡單而又快速的12% SDS-PAGE彩色(綠色)凝膠配制試劑，能夠同時制備下層膠(即分離膠)和上層膠(也稱濃縮膠、積成膠)，用戶只需準(zhǔn)備制膠設(shè)備，即可快速制備蛋白凝膠。同時，試劑盒中上層膠溶液B中含有綠色染料，使得蛋白點樣孔清晰呈現(xiàn)，實現(xiàn)了加樣過程的可視化，極大的提高了加樣效率。該綠色染料可在上層膠中穩(wěn)定存在，不會隨著電泳而遷移至下層膠，不會影響電泳和染色效果，電泳完成后也便于識別上層膠并切除，不影響后續(xù)Western Blot等實驗。
本試劑盒可制備常規(guī)尺寸的凝膠50塊，具體配制的凝膠塊數(shù)量與凝膠的厚薄以及凝膠的大小有關(guān)。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；
4℃避光保存，有效期12個月。
操作步驟
1. 根據(jù)目的蛋白分子量和所選電泳緩沖液不同，選擇合適濃度的SDS-PAGE下層膠，參照表格如下：
|
SDS-PAGE分離膠濃度 |
最佳分離范圍（kDa） （Tris-Glycine電泳緩沖液） |
最佳分離范圍（kDa） （SWE快速高分辨電泳緩沖液） |
|
6% |
50-300 |
15-300 |
|
8% |
30-130 |
10-250 |
|
10% |
20-100 |
5-150 |
|
12% |
10-60 |
3-100 |
|
15% |
<40 |
<60 |
2. 配制10% AP溶液：稱取AP（過硫酸銨）粉末0.1 g，用1 mL水完全溶解。該溶液4℃存貯1-2周有效，-20℃保存3個月有效；
3. 根據(jù)實驗需求，等比例混合溶液A和B，加入適量的10% AP溶液（100倍稀釋），分別配制下層膠溶液、上層膠溶液。不同規(guī)格以及不同厚度的玻璃板可以等比例調(diào)整上層膠和下層膠溶液的配制體積，以常用規(guī)格8.3 cm×7.3 cm凝膠板（單塊）為例，推薦配制體系如下表格：
|
配制組別 |
組分 |
0.75 mm玻璃板 |
1.0 mm玻璃板 |
1.5 mm玻璃板 |
|
下層膠溶液 |
6%下層膠溶液A |
2 mL |
2.5 mL |
4 mL |
|
6%下層膠溶液B |
2 mL |
2.5 mL |
4 mL |
|
|
10% AP |
40 μL |
50 μL |
80 μL |
|
|
上層膠溶液 |
上層膠溶液A |
1 mL |
1 mL |
1.5 mL |
|
上層膠溶液B(綠色) |
1 mL |
1 mL |
1.5 mL |
|
|
10% AP |
20 μL |
20 μL |
30 μL |
4. 裝配好凝膠制具，先加入配制好的下層膠溶液，并立即緩慢均勻的加入配制好的上層膠溶液（也可使用蒸餾水封住下層膠液面，待下層膠凝固充分后再加入配制好的上層膠溶液，約15-30 min），插入梳子，待其凝固（約15-30 min左右）后即可使用；
5. 配制完成的凝膠如不能當(dāng)天使用，可4℃保存1-2天。
6. 推薦電泳條件：
a. 使用SWE快速高分辨電泳緩沖液進行電泳：200-250 V，25-35 min；
b. 使用Tris-Glycine電泳緩沖液進行電泳：上層膠90 V，約30 min（marker進入分離膠）；下層膠150-180 V，約60-90 min(可根據(jù)實際情況調(diào)整)。
注意事項
1. 上層膠溶液B長時間靜置容易產(chǎn)生絮狀沉淀，使用前請輕輕顛倒混勻。
2. 上層膠溶液B和下層膠溶液B均含有SDS，使用時請勿劇烈搖晃，避免產(chǎn)生氣泡，從而影響凝膠灌制。
3. 預(yù)混液中存在單體丙烯酰胺，對人體有害，操作時請注意做好防護措施。
4. 為了保證樣本同時進入分離膠，直接灌制上層膠時需緩慢均勻的加入配制好的上層膠溶液。
5. 加入AP之后盡快灌制凝膠，請勿長時間放置。
6. 膠的凝固與溫度有顯著的正相關(guān)性。同等條件下，溫度越高，凝固速度越快。
7. 如需進一步加快凝膠速度，臨配膠前可按需補充適量TEMED，同時增加0.5倍10% AP使用量。
8. 本公司同時提供其他彩色（紅色、黃色、藍色）上層膠溶液，以區(qū)別不同樣本不同凝膠電泳。
9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問，請于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請保證該產(chǎn)品，以備本公司進行核對檢驗。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題，請于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進行質(zhì)檢，確認產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進行驗收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價格范圍之賠償?？蛻粼谑褂眠^程中有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時給予解答。
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