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產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項(xiàng)
產(chǎn)品描述
Calcein AM是在Calcein（鈣黃綠素）的基礎(chǔ)上，引入了一個乙酰甲氧基甲酯（AM）基團(tuán)，AM基團(tuán)不僅掩蓋了Calcein螯合鈣的分子部分且增強(qiáng)了其疏水性，因此可以使Calcein AM輕易穿透活細(xì)胞膜，被細(xì)胞內(nèi)源性酯酶剪切為Calcein。失去AM基團(tuán)的Calcein不能輕易通過細(xì)胞膜，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)；此外螯合鈣的分子部分被暴露出來，使得Calcein探針和活細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合，并發(fā)出較強(qiáng)綠色熒光。而死細(xì)胞缺乏酯酶，并不能使Calcein AM被水解成能Calcein，故無法標(biāo)記死細(xì)胞。Calcein AM細(xì)胞毒性低，對細(xì)胞功能影響較小，如細(xì)胞增殖或淋巴細(xì)胞的趨化性等，是一款非常適用于活細(xì)胞染色的熒光探針。
本產(chǎn)品Calcein AM細(xì)胞活性檢測試劑盒也被稱為細(xì)胞熒光計(jì)數(shù)試劑盒（Cell Fluorescence Counting Kit，CCK-F），是通過Calcein AM熒光探針標(biāo)記活細(xì)胞，來評判細(xì)胞的活性、毒性、增殖的檢測試劑盒。本試劑盒經(jīng)過優(yōu)化和調(diào)試，不僅檢測靈敏度高、線性范圍寬，且只需要短時間的孵育，便可完成對細(xì)胞的檢測。操作簡單，不需要放射性同位素標(biāo)記、也不需要結(jié)晶溶解等步驟，可減少實(shí)驗(yàn)操作帶來的誤差，提高準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
儲存與運(yùn)輸
冰袋(wet ice)運(yùn)輸；
-20℃保存，Calcein AM溶液需避光保存，并盡量避免反復(fù)凍融；12個月有效。
操作步驟
1. Calcein AM檢測工作液配制：
根據(jù)96孔板每孔100 μL使用量，參考下表，將Calcein AM溶液和CCK-F檢測緩沖液按比例混合，配制成Calcein AM檢測工作液。
|
Component |
10個樣品 |
50個樣品 |
100個樣品 |
|
Calcein AM溶液 |
10 μL |
50 μL |
100 μL |
|
CCK-F檢測緩沖液 |
1 mL |
5 mL |
10 mL |
2. 貼壁細(xì)胞檢測：
以下步驟主要對應(yīng)96孔板檢測方案，其他孔板體系需視情況進(jìn)行調(diào)整。
a. 細(xì)胞種板：將細(xì)胞按一定密度均勻接種于96孔板中，對其進(jìn)行藥物或者其他前處理（接種密度由細(xì)胞的大小、生長速度等因素決定）；
b. （選做）細(xì)胞洗滌：吸取原培養(yǎng)基，用PBS緩沖液洗滌1-2次，減少血清、酚紅或者藥物對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾；
c. 探針標(biāo)記：去除細(xì)胞培養(yǎng)基或PBS緩沖液后，加入100 μL Calcein AM檢測工作液，于37℃避光孵育30 min；
d. （選做）細(xì)胞孵育：更換細(xì)胞培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育15-30 min，以確保細(xì)胞內(nèi)Calcein AM充分水解；
e. 熒光檢測：使用酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光讀數(shù)，Calcein AM探針最大激發(fā)光波長為501 nm，最大發(fā)射光波長為521 nm。細(xì)胞活性與熒光強(qiáng)度成正比。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，也可進(jìn)一步復(fù)染細(xì)胞核或使用其他儀器（例如熒光顯微鏡）檢測。
1. 懸浮細(xì)胞檢測：
a. 細(xì)胞接種：將細(xì)胞按一定密度均勻接種于24孔板中，對其進(jìn)行藥物或者其他前處理（接種密度由細(xì)胞的大小、生長快慢等因素決定）；
b. （選做）細(xì)胞洗滌：1000 g離心3-5 min去除原培養(yǎng)基，用PBS緩沖液洗滌1-2次，每次需要1000 g離心3-5 min，以減少血清、酚紅或者藥物對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾；
c. 探針標(biāo)記：1000 g離心3-5 min后，去除細(xì)胞培養(yǎng)基或PBS緩沖液，加入適量Calcein AM檢測工作液，于37℃避光孵育30 min；
d. （選做）細(xì)胞孵育：更換細(xì)胞培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育15-30 min，以確保細(xì)胞內(nèi)Calcein AM充分水解；
e. 熒光檢測：使用酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀對其進(jìn)行熒光檢測，Calcein AM探針最大激發(fā)光波長為501 nm，最大發(fā)射光波長為521 nm。細(xì)胞活性與熒光強(qiáng)度成正比。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，也可以進(jìn)一步復(fù)染細(xì)胞核或用其他儀器（例如熒光顯微鏡）檢測。
注意事項(xiàng)
1. Calcein AM溶液在使用前進(jìn)行短時離心，以減少試劑損失。
2. Calcein AM溶液避免反復(fù)凍融，收到產(chǎn)品后建議適當(dāng)分裝，于-20℃避光密封保存。
3. Calcein AM在水溶液中不穩(wěn)定，Calcein AM檢測工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，24 h內(nèi)有效。
4. 由于不同細(xì)胞狀態(tài)不同，Calcein AM檢測工作液孵育的時間和濃度可以視情況進(jìn)行調(diào)整。
5. 使用酶標(biāo)儀檢測熒光強(qiáng)度時，請使用黑色細(xì)胞培養(yǎng)板。
6. 熒光染料存在淬滅問題，請避光操作和存放。
7. 為了您的健康和安全，操作時請穿好實(shí)驗(yàn)服、戴好手套。
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問，請于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請保證該產(chǎn)品，以備本公司進(jìn)行核對檢驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題，請于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢，確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價(jià)格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價(jià)格范圍之賠償?？蛻粼谑褂眠^程中有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時給予解答。
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